吴哲没怎么放心上,他这边终于是把程序给搞了出来,然后把程序丢给了仲。让他不停地输入前面的实验数据,&nbp;检验正确率。
而他则开始穿着无菌服在实验室里面做起了anger测序。他被唐梦带着做了两次后,就能自己独立操作了。
先利用dna聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。
每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dntp),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddntp)。由于ddntp缺乏延伸所需要的3-h基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在g、a、t或处终止。
终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dntp和ddntp的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。
它们具有共同的起始点,但终止在不同的核苷酸上,&nbp;可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用x-光胶片放射自显影进行检测。
这样一来,&nbp;测序的步骤就非常的多,包括了加入缓冲溶剂,离心分离,热循环,凝胶板的制作到最后的电泳。就算是以吴哲的控制力也不能百分百的把握能每次都能成功。而这些成功后,还需要数据分析和对比。
而且很多dna提取物包括质粒小量制备来说,并不能给出一个可信的dna浓度估计,混杂的染色体dna、蛋白、rna、有机物及无机化合物均可能有260&nbp;n光吸收,核糖核酸酶处理所产生核糖核苷酸,虽然它们在电泳后dna样品的前面,也并不能观察到。这更加的拉慢了实验的进度。
吴哲进过反复的研究,那个数学模型只能治标不能治本。不直接对实验本身进行改变的话,对本质来说,没什么太大的作用。
吴哲出了实验室,他现在也没什么好的办法。如果改进的话从哪一步入手,&nbp;前面的方法暂时没什么办法,那凝胶板和电泳有没有什么可以改变的。
吴哲是知道后来有了新的测序手段的,&nbp;因为有段时间,&nbp;关于基因检测的商业活动弄得满天飞。后来国家还出台了法规。对于以此牟取暴利的不法分子进行了打击。他隐约记得应该是和芯片的提高有关。但怎么和芯片关联起来,现在的他也一头雾水。
皱着眉头,走进